Середовище Олькеницького, також відоме, як три-цукровий агар з сечовиною. Стерильне розплавлене середовище розливають у пробірки так, щоб при застиганні утворився заповнений "стовбчик" та "косяк" контактуючий з повітрям. Колір готового середовища червоний або помаранчевий. Посів культури проводиться проколюванням середовища мікробіологічною петлею до самого дна пробірки. Зразки культивують при 37°С протягом 24 годин, після чого оцінюють зміну зовнішнього вигляду середовища. За його допомогою можна виявити 5 показників:

Ферментація глюкози - жовтий "стовбчик";

Ферментація сахарози та (або) лактози - жовтий "косяк";

Утворення сірководню - почорніння;

Ферментація сечовини - малинове забарвлення;

Утворення газу - бульбашки в товщі агару.